葉綠素(Chlorophyll)檢測試劑盒(微板法)的計算
產(chǎn)品簡介：
葉綠體是光合作用的細(xì)胞器，在光合作用研究中，常需要用提取的葉綠體展開下游研究工作，葉綠體中所含的色素主要有兩大類，葉綠素(包括葉綠素 a 和葉綠素 b)和類胡蘿卜素(包括胡蘿卜素和葉黃素)，它們與類囊體膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合，成為色素蛋白復(fù)合體，其中葉綠素又稱葉綠體色素(Chlorophyll)。葉綠素(Chlorophyll)檢測試劑盒(微板法)檢測原理是葉綠素不溶解于水，而溶于有機溶劑，以有機溶劑提取葉綠素，根據(jù)朗伯-比爾定律，某有色溶液的吸光度(A)與其中溶質(zhì)濃度(C)和液層厚度(L)成正比，即 A=αCL，其中α為比例常數(shù)，當(dāng)溶液濃度以百分比濃度為單位，層液厚度為 1cm 時，α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)，在該試劑盒情況下葉綠素 a 和葉綠素 b 在 665nm、649nm 處有最大吸收波，根據(jù)經(jīng)驗公式可計算出葉綠素 a、葉綠素 b及總?cè)~綠素含量，主要用于植物組織中葉綠素的提取以及定量檢測葉綠素 a、葉綠素 b 及總?cè)~綠素含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
操作步驟(僅供參考)：
1、葉綠素提取：
①取菠菜或其他植物新鮮葉片，洗凈，擦干，去中脈，稱取剪碎的新鮮樣品 0.1g，置于研缽或勻漿器，加入少量提取粉劑(約 50mg)和 1ml Chlorophyll Assay Buffer，研磨或勻漿成液態(tài)。
②將研磨液或勻漿液轉(zhuǎn)移至 10ml 離心管，用少量 Chlorophyll Assay Buffer 沖洗研缽 或勻漿器數(shù)次，最后連殘渣一同倒入 10ml 離心管，補加 Chlorophyll Assay Buffer 至
10ml，混勻，避光放置 5min～2h。注：也可將組織剪碎，加入 Chlorophyll Assay Buffer，
避光放置 12~36h，期間晃動數(shù)次，使組織與提取試劑充分接觸，當(dāng)組織接近白色，即表示色素提取完成，如果仍有較多組織顏色，應(yīng)繼續(xù)浸提至組織殘渣顏色接近于白色。
2、濾紙或三層紗布過濾，留取濾液，也可采用 4000r/min 離心 5min，取上清液待測。
3、測定：酶標(biāo)儀開機預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)多波長至 665nm 和 649nm；取葉綠素提取液 200μl 加入 96 孔板中，以 Chlorophyll Assay Buffer 調(diào)零，分別用酶標(biāo)儀測定提取液在 665nm、649nm 處吸光度(A665、A649)。
計算：
葉綠素 a 含量(mg/g)=Ca×V×N/(W×1000)
葉綠素 b 含量(mg/g)=Cb×V×N/(W×1000)
總?cè)~綠素含量(mg/g)=CT×V×N/(W×1000)
式中：Ca=(13.95×A665-6.88×A649)/0.6=23.25×A665-11.467×A649 (mg/L)
Cb=(24.96×A649-7.32×A665)/0.6=41.6×A649-12.2×A665 (mg/L)
CT=(6.63×A665+18.08×A649)/0.6=11.05×A665+30.133×A649 (mg/L)
V=葉綠素提取液體積(ml)=10(ml)
N=稀釋倍數(shù)
W=樣品鮮重或干重(g)
1000=ml 與 L 的單位換算
0.6=200μl 提取液在酶標(biāo)板中的光徑(cm)
注意事項：
1、 為了避免葉綠素見光分解，操作時應(yīng)盡量避光，研磨或勻漿時應(yīng)盡量縮短時間。
2、 當(dāng)樣品吸光值大于 1 時，可適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，計算時乘以稀釋倍數(shù)。
3、 Chlorophyll Assay Buffer 易揮發(fā)，不用時需擰緊瓶蓋。
4、 葉綠素提取液不能出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，否則應(yīng)重新過濾。
5、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期：12 個月有效。
葉綠素(Chlorophyll)檢測試劑盒(微板法)的計算
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