學(xué)習(xí)食品微生物學(xué)基礎(chǔ)
1.大腸菌群檢驗(yàn)中為什么首先要用乳糖膽鹽發(fā)酵管?
答: 因?yàn)槿樘悄扄}發(fā)酵管中的成分有溴甲酚紫，中性時(shí)呈藍(lán)紫色，酸性時(shí)呈黃色。如果顏色變黃色，說明可能出現(xiàn)能分解乳糖產(chǎn)酸的大腸菌群；如果顏色不變(量藍(lán)紫色)，說明無產(chǎn)酸的大腸菌群；膽鹽可以抑制其它細(xì)菌生長繁殖；看杜氏小管中是否有氣體，判斷是否為分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸自群。
2.食品中檢出的菌落總數(shù)是否代表該食品上的所有細(xì)菌數(shù)?為什么？
答: 不能代表該食品上所有細(xì)菌菌數(shù)。因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)過程中會(huì)造成細(xì)菌的損失或死亡，食品上的細(xì)菌包括了各種各樣的微生物。
3.為什么營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基在使用前要保持(46士1)℃的溫度?
答：因?yàn)闋I養(yǎng)瓊脂溫度，若溫度高于(46士1)℃ 容易將驗(yàn)樣中的菌燙死；若溫度低于(46士1) ℃則營養(yǎng)瓊脂會(huì)凝固，影響培養(yǎng)效果。
4.食品檢驗(yàn)為什么要測定細(xì)菌菌落總數(shù)?
答:測定細(xì)菌菌落總數(shù)是檢驗(yàn)食品純度程度的指標(biāo)，也是判斷其保存能力的指標(biāo)。
5.做空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)的目的?
答:目的是檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否受到污染，驗(yàn)證無菌操作。
6.為什么大腸菌群的檢驗(yàn)要經(jīng)過復(fù)發(fā)酵才能證實(shí)？
答:初發(fā)酵是樣品的發(fā)酵結(jié)果，不是大腸菌群純菌的發(fā)酵試驗(yàn)，有可能受其它雜菌影響判斷結(jié)果。進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)避免假陽性結(jié)果。
7.復(fù)發(fā)酵為什么使用乳糖發(fā)酵管但不需加膽鹽?
答: 膽鹽能抑制革蘭氏陽性菌等雜菌生長，在初發(fā)酵培養(yǎng)基已經(jīng)加入膽鹽抑制革蘭氏陽性菌生長，并在EMB培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng)，因此復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)無需乳糖發(fā)酵管，以免大腸菌群受到抑制。
8.用油鏡觀察時(shí)應(yīng)注意哪些問題?在載玻片和鏡頭之間加滴什么油?起什么作用?
答:應(yīng)要擦掉油加香柏油，作用是增加折光率,也就是增加了顯微鏡的分辨率。油的折光率和分辨率成反比(有公式),同時(shí)與波長成正比。
9.那些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭色染色結(jié)果的正確性?其中zui關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么?
答:涂片環(huán)節(jié)、加熱固定環(huán)節(jié)、脫色環(huán)節(jié)，其中zui關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是脫色環(huán)節(jié)。
10.什么是物鏡的同焦現(xiàn)象?它在顯微鏡觀察中有什么意義?
答:在一般情況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進(jìn)行觀察時(shí)，物像將保持基本準(zhǔn)焦的狀態(tài)。這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時(shí)僅用細(xì)調(diào)節(jié)器即可對(duì)物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時(shí)可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。
11.影響顯微鏡分辨率的因素有那些?
答:物鏡的NA值（物鏡的數(shù)值孔徑)與照明光源的波長。
12.應(yīng)如何根據(jù)所觀察微生物的大小，選擇不同的物鏡進(jìn)行有效地觀察？
答:細(xì)菌用油鏡，真菌用高倍鏡。都是先用低倍鏡找到目標(biāo)后，再用高倍鏡太調(diào)到合適的視野和合適的清晰度。
如：放線菌、酵母菌、多細(xì)胞真菌相對(duì)較大，用放大40倍的物鏡就可以看了；細(xì)菌小，要用放大1000倍的物鏡看，感覺還很小；病毒那就要用電子顯微鏡看了。
13.進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)。為什么特別強(qiáng)調(diào)菌齡不能太老。用老齡細(xì)菌染色會(huì)出現(xiàn)什么問題?
答:著色不均，染色效果不好；陰性陽性不明顯，分不太清楚，問題是不便于顯微鏡下觀察是陽性茵還是陰性菌。
14.比較低倍鏡、高倍鏡及油鏡各方面的差異。為什么在使用高倍鏡及油鏡時(shí)應(yīng)特別注意避免粗調(diào)節(jié)器的誤操作？
答:使用高倍鏡和油鏡時(shí)鏡頭距高標(biāo)本較近，而粗調(diào)節(jié)器的調(diào)節(jié)幅度較大，粗調(diào)節(jié)器的誤操作會(huì)使鏡頭大幅度向標(biāo)本移動(dòng)，很容易損壞標(biāo)本和鏡頭。一般先用低倍鏡找到物象后換到高倍鏡，就只需要用細(xì)調(diào)節(jié)器了。
15.革蘭氏染色時(shí)，初染前能加碘液嗎?乙醇脫色后復(fù)染之前，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性茵應(yīng)分別是什么顏色?
答:不可以。因?yàn)榈馀c染料會(huì)結(jié)合成大分子，使得染料分子不能穿過細(xì)胞的細(xì)胞壁，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。脫色后、復(fù)染前，革蘭氏陽性菌呈紫色，陰性菌無色。
16.不經(jīng)過復(fù)染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌?
答:不行。在復(fù)染之前，革蘭氏陰性菌是無色透明的。在顯微鏡下很難觀察到或者脫色過度，也會(huì)造成陽性菌脫色。不經(jīng)過復(fù)染，無法進(jìn)一步區(qū)別。
17.為什么要求制片*干燥后才能用油鏡觀察?
答：1.若未*干燥載玻片上的液體會(huì)污染油鏡鏡頭，鏡頭非常精密被污染后不利于下次觀察。 2.若未*干燥，水滴會(huì)影響油與玻璃之間折光率，造成視野不夠清晰。
18.如果涂片未以熱固定將會(huì)出現(xiàn)什么問題?加熱溫度過高、時(shí)間太長，又會(huì)怎么樣呢?
答：如果沒有加熱固定的話，水分蒸發(fā)太慢或者在染色時(shí)菌體會(huì)被沖洗掉；如果加熱時(shí)間過久，菌體變形或形態(tài)破壞，無法染色。
19.制各培養(yǎng)基的一般程序是什么?
答:稱量一一溶解——調(diào)pH值——融化瓊脂——過濾分裝——包扎標(biāo)記——滅菌一一倒干板。
20.做過實(shí)驗(yàn)后，你認(rèn)為在制各培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)注意些什么問題?
答:溶解配料的水要適量；pH要調(diào)節(jié)合適；要小心手提式高壓鍋的使用；倒平板時(shí)要防止培養(yǎng)基被污染。
21.滅菌在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作中有何重要意義?
答:防止培養(yǎng)基被污染；防止雜菌影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
22.試述高壓蒸汽滅菌的操作方法和原理？
答:高壓滅菌的原理是:在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃，在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。
操作方法: 加水——裝料、加蓋一一排氣一一升壓、保壓和降壓一一取料
23.高壓蒸汽滅菌時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)?
答:第-一：無菌包不易過大，不易過緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對(duì)流易滲透到包裹。第二：布類物品應(yīng)放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮，阻礙蒸汽進(jìn)入包裹，嚴(yán)重影響滅菌效果。第三：定期檢查滅菌效果。
24.如何確定平板上某單個(gè)菌落是否為純培養(yǎng)?
答:通過觀察菌落特征；單個(gè)菌落再次劃線分離。
25.試述如何在接種中，貫徹?zé)o菌操作的原則?
答:保持操作臺(tái)的無菌狀態(tài)與在無菌室操作；操作前，要進(jìn)行手的消毒；接種環(huán)要加熱滅菌；接種物品要標(biāo)記。
26.菌種保藏中，石蠟油的作用是什么?
答:作用是密封，防止空氣進(jìn)入，降低菌種的生理活性。
27.比較霉菌菌絲與假絲酵母菌絲的區(qū)別
答:假絲酵母是指能形成假菌絲、不產(chǎn)生子囊孢子的酵母。假菌絲沒有橫隔，各細(xì)胞間僅以狹小的面積相連，呈藕節(jié)狀，在分隔處溢縮。霉菌的菌絲大多有橫隔， 整個(gè)菌絲的直徑粗細(xì)胞直徑一致，且分枝與主于的直徑一致；菌絲頂端常呈鈍圓形，相連細(xì)胞間的橫隔面積與細(xì)胞直徑一致，是竹節(jié)狀的細(xì)胞串。假菌絲與真茵絲明顯不同處在于其兩細(xì)胞間有一細(xì)腰，而不象直正菌絲橫隔處兩細(xì)胞寬度一致。
28.細(xì)菌與酵母菌的菌落有何區(qū)別？
答:細(xì)菌菌落光滑，易于基質(zhì)脫離；酵母菌菌落較細(xì)菌菌落大而厚且酵母菌的菌落較濕潤。
29.為什么隨著顯微鏡放大倍數(shù)的改變。目鏡測微計(jì)每格相對(duì)的長度也會(huì)改變?能找出這種變化的規(guī)律嗎?
答:因?yàn)槟跨R測微尺所測量的是微生物細(xì)胞經(jīng)地顯微鏡放大之后所成像的大小；規(guī)律是刻度實(shí)際代表的長度隨使用的目鏡和物鏡放大倍數(shù)及鏡簡的長度而改變。
30.經(jīng)常使用的細(xì)菌菌株，使用哪種保藏方法比較好?
答:用甘油冷凍保藏方法保存，在液體培養(yǎng)基中加入15%的甘油，然后低溫冷凍（-7度)左右。
31.能否用血球計(jì)數(shù)板在油鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)?為什么?
答:不能。計(jì)數(shù)時(shí)滴在血球計(jì)數(shù)板上的是懸菌液，相當(dāng)于在鏡頭和計(jì)數(shù)板直接加了一層水。水層會(huì)降低視野的亮度和顯微鏡的分辨率，造成菌體和網(wǎng)格線不清晰.
32.血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來自那些方面?如何減少誤差?
答:誤差主要來自試劑誤差、方法誤差、儀器誤差；減少誤差有保持樣品的純凈、細(xì)胞溶液必須震蕩均勻、樣品濃度要適中、血球計(jì)數(shù)板整潔清晰。
33.
為何要用乳酸-石炭酸溶液作霉菌水浸片?
答:用乳酸-石炭酸的優(yōu)點(diǎn)是可使細(xì)胞不變形，具有殺菌、防腐作用；不易干燥，能保持軟長時(shí)間；能防止孢于四處飛散。
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