E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個結構基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?；D移酶，此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調節(jié)基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結合，使操縱子（元）受阻遏而處于關閉狀態(tài)。在啟動序列P上游還有一個分解（代謝）物基因激活蛋白（CAP）結合位點。由P序列、O序列和CAP結合位點共同構成lac操縱子的調控區(qū)，三個酶的編碼基因即由同一調控區(qū)調節(jié)，實現(xiàn)基因產物的協(xié)調表達 。在沒有乳糖存在時，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)。此時，I序列在PI啟動序列操縱下表達的Lac阻遏蛋白與O序列結合，阻礙RNA聚合酶與P序列結合，抑制轉錄起動。當有乳糖存在時，lac操縱子（元）即可被誘導。在這個操縱子（元）體系中，真正的誘導劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞，經b－半乳糖苷酶催化，轉變?yōu)榘肴樘恰：笳咦鳛橐环N誘導劑分子結合阻遏蛋白，使蛋白構象變化，導致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉錄。異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一種作用*的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實驗室廣泛應用。
材料
1、誘導表達材料
( 1 ) LB （Luria―Bertani）)培養(yǎng)基
酵母膏 (Yeast extract) 5g 蛋白胨 (Peptone) 10g
NaCl 10g 瓊脂 (Agar) 1-2%
蒸餾水 (Distilled water) 1000ml pH 7.0
適用范圍：大腸桿菌(Escherichia coli)
( 2 ) IPTG 貯備液：2 g IPTG溶于10 mL 蒸餾水中，0 . 22 μm 濾膜過濾除菌，分裝成1 mL /份，－20 ℃ 保存。
( 3 ) l× 凝膠電泳加樣緩沖液：
50 mmol / L Tris -CI ( pH 6 . 8 )
50 mmol / L DTT
2 % SDS （電泳級）
0.1 ％ 溴酚藍
10 ％ 甘油
2、大腸桿菌(Escherichia coli)包涵體的分離與蛋白純化材料
1 ）酶溶法
（1）裂解緩沖液：
50 mmol / L Tris-CI ( pH 8 . 0 )
1 mmol / L EDTA
100 mmol / LNaCI
（2）50 mmol / L 苯甲基磺酰氟（PMSF ）。
（3）10 mg / mL 溶菌酶。
（4）脫氧膽酸。
（5）1 mg / mL DNase I。
elisa試劑盒，進口elisa試劑盒，放射免疫試劑盒，amresco，Gibco培養(yǎng)基-南京信帆生物技術有限公司
在線咨詢